Phát hiện Mycobacterium Tuberculosis kháng Isoniazid, Rifampin và Ethambutol bằng kỹ thuật Real-time PCR

- Phát hiện Mycobacterium Tuberculosis kháng Isoniazid, Rifampin và Ethambutol bằng kỹ.
- thuật Real-time PCR.
- Xây dựng quy trình real-time PCR phát hiện nhanh các mẫu lao đột biến kháng Isoniazid (đột biến gen katG ở codon 315 AGC-ACC (Ser315Thr.
- Kỹ thuật Real- time PCR.
- Vi khuẩn lao.
- Lao kháng thuốc..
- Bệnh lao và vi khuẩn gây bệnh lao đã được biết rõ từ hơn một thế kỷ nay.
- Tuy nhiên, trong những thập niên 90 đến nay, đã xuất hiện nhiều chủng vi khuẩn lao kháng thuốc, rất khó chữa trị và đang có nguy cơ lây lan rất nhanh, đe dọa hàng triệu người trên thế giới..
- Y học thế giới những năm gần đây đã ghi nhận chủng vi khuẩn gây bệnh lao kháng đa thuốc mới gọi là lao siêu kháng thuốc.
- Những người mắc bệnh lao với chủng vi khuẩn mới này cần phải điều trị trên 2 năm so với từ 6-8 tháng như trước đây và chi phí điều trị cũng.
- WHO ước tính, đến nay đã có 27 ngàn ca bệnh lao mới kháng thuốc ở 41 quốc gia [47]..
- Việc điều trị cho bệnh nhân lao kháng đa thuốc hết sức nghiêm ngặt, cần phải theo dõi liên tục trong 2 năm.
- Một số bệnh nhân sau một thời gian uống thuốc, thấy mình khỏe và không có triệu chứng gì, cho rằng mình đã khỏi bệnh nên tự ý bỏ trị lao.
- Bệnh nhân không biết rằng vi trùng lao “sống dai” và rất nguy hiểm.
- Ngoài ra, cũng có những bệnh nhân bị khó chịu do tác dụng phụ của thuốc lao trong quá trình điều trị, nhưng không đến tái khám để bác sỹ điều chỉnh thuốc, mà tự bỏ trị nửa chừng.
- Cũng có những bệnh nhân uống thuốc lao không đều đặn, hay uống không đủ liều thuốc….
- Nếu điều trị không đầy đủ, vi khuẩn kháng thuốc càng mạnh hơn và khả năng hồi phục càng trở nên mong manh..
- Và sẽ cực kỳ nguy hiểm cho cộng đồng, bởi lao kháng đa thuốc đã rất khỏe sẽ từ bệnh nhân lây lan trong cộng đồng do bị phát tán trong không khí, môi trường sinh hoạt [26,28]..
- Việt Nam đứng thứ 12 trong 22 nước có số bệnh nhân lao cao trên toàn cầu [2].
- Tỷ lệ lao đa kháng thuốc trong tổng số ca nhiễm lao mới là 2.7%, và trong tổng số ca đã qua điều trị là 19%.
- Theo số liệu bệnh nhân lao đăng ký điều trị lao tại TP.
- HCM năm 2008, với tỷ lệ kháng đa thuốc (kháng ít nhất với Rifampin và Isoniazid) vào khoảng 3.8% trong số bệnh nhân mới và trên 22% ở bệnh nhân lao tái điều trị [1,2].
- Ở nghiên cứu này chúng tôi tập trung nghiên cứu phát hiện vi khuẩn lao kháng 3 loại thuốcchủ yếu trong điều trị lao là Rifampin, Isoniazid, và Ethambutol..
- Để phát hiện lao đa kháng thuốc có các phương pháp như : làm xét nghiệm nuôi cấy vi trùng lao từ các mẫu bệnh phẩm như đờm, dịch cơ thể… và làm kháng sinh đồ lao .
- Tuy nhiên, hai xét nghiệm này có giá thành đắt, và không dùng phổ biến cho mọi bệnh nhân bị lao[5]..
- Một trong số đó là kỹ thuật real-time PCR, sử dụng kỹ thuật real-time PCR là một kỹ thuật hoàn toàn mở, nhanh, nhạy, chính xác, không lệ thuộc vào các hãng sản.
- xuất kít ở nước ngoài, giá thành rẻ hơn,… nên chúng tôi chọn real-time PCR để phát hiện các đột biến kháng isoniazid, Rifampin và ethambutol trên vi khuẩn lao trong mẫu bệnh phẩm..
- Phát hiện Mycobacterium tuberculosis kháng Isoniazid, Rifampin và Ethambutol bằng kỹ thuật real- time PCR”.
- Nguyễn Văn Hưng Những kỹ thuật mới trong chẩn đoán vi khuẩn học bệnh lao", Nội san lao và bệnh phổi, 26 tr.
- Lê Đình Lương, Quyền Đình Thi (2004), Kỹ thuật di truyền và ứng dụng, Nhà xuất bản Đại học Quốc gia Hà Nội.
- Khuất Hữu Thanh (2005), Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật..
- Quyền Đình Thi, Nông Văn Hải (2008), Những kỹ thuật PCR và ứng dụng trong phân tích DNA – tập 2, Nhà xuất bản Khoa học Tự nhiên và Công nghệ Hà Nội..
- Abdelaal A., El-Ghaffar H.A., Zaghloul M.H.E., et al.
- Genotypic detection of Rifampin and isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis strains by DNA sequencing: a randomized trial", Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials, 8 (4): doi .
- Banaiee N., Bobadilla-del-Valle M., Riska P.F., et al.
- Rapid identification and susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from MGIT cultures with luciferase reporter mycobacteriophages", J Med Microbiol .
- Dubnau E., Quemard A., et al inhA, a gene encoding a target for isoniazid and ethionamide in Mycobacterium tuberculosis.".
- Canetti G., Froman S., Grosset J., et al.
- Caviedes L., Lee T.S., Gilman R.H., et al.
- Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth culture", J Clin Microbiol, 38: 1203..
- Cengiz Cavusoglu et al.
- Characterization of rpoB mutation in rifampin- resistant clinical isolates of mycobacterium tuberculosis form Turkey by DNA sequencing and line mẫu dò assay.
- Rapid detection of resistance in Mycobacterium.
- El Hajj H.H., Marras S.A., Tyagi S., et al.
- Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons", J.
- Espasa M., Gonzalez-Martin J., Alcaide F., et al.
- Direct detection in clinical samples of multiple gene mutations causing resistance of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid and Rifampin using fluorogenic mẫu dòs", J Antimicrob Chemother, 55:.
- Hirano et al.
- Mutations in the rpoB gene of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis strains isolate mostly in Asian contries and their rapid detection by line mẫu dò assay.
- Hausdorfer J., Sompek E., Allerberger F., et al.
- E-test for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis", Int J Tuberc Lung Dis, 2: 751..
- Detection of Isoniazid-Resistant Mycobacterium tuberculosis Strains by a Multiplex Allele-Specific PCR Assay Targeting katG Codon 315 Variation..
- Igor Mokrousov et al (2003).
- Allele-specific rpoB PCR assays for detection of Rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis in Sputum Smears.
- Isoniazid, The Frontline of Resistance in Mycobacterium tuberculosis.
- Johnson R., Streicher E.M., Louw G.E., et al.
- Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis", Curr.
- Kim S.Y., Park Y.J., Song E., et al.
- Evaluation of the CombiChip Mycobacteria Drug- Resistance detection DNA chip for identifying mutations associated with resistance to isoniazid and rifampin in Mycobacterium tuberculosis", Diagn Microbiol Infect Dis .
- Le T.K., Bach K.H., Ho M.L., et al.
- Molecular fingerprinting of Mycobacterium tuberculosis strains isolated in Vietnam using IS6110 as mẫu dò", Tuber Lung Dis .
- A single point mutation in the embB gene is responsible for resistance to ethambutol in Mycobacterium smegmatis.
- Luo T, Jiang L, Sun W, Fu G, Mei J, Gao Q (2011), “Multiplex Real-time PCR Melting Curve Assay To Detect Drug-Resistant Mutation of Mycobacterium tuberculosis”, J Clin Microbiol .
- Use of Real-Time PCR and Fluorimetry for Rapid Detection of Rifampin and Isoniazid Resistance-Associated Mutations in Mycobacterium tuberculosis.
- Colorimetric redox-indicator methods for the rapid detection of multidrug resistance in Mycobacterium tuberculosis:.
- A Ser315Thr substitution in katG is predominant in genetically heterogeneous multi-drug resistant Mycobacterium tuberculosis isolates originating from the St.
- Morcillo N., Zumarraga M., Alito A., et al.
- A low cost, home-made, reverse-line blot hybridisation assay for rapid detection of Rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis", Int J Tuberc Lung Dis .
- Musa H.R., Ambroggi M., Souto A., et al.
- Drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis by a nitrate reductase assay applied directly on microscopy-positive sputum samples", J Clin Microbiol .
- Niemann S., Rusch-Gerdes S,, Richter E IS6110 fingerprinting of drug- resistant Mycobacterium tuberculosis strains isolated in Germany during J Clin Microbiol .
- Ramaswamy SV, Amin AG, Goksel S, Stager CE, Dou SJ, El Sahly H, et al..
- Molecular genetic analysis of nucleotide polymorphisms associated with ethambutol resistance in human isolates of Mycobacterium tuberculosis.
- Palomino J.C., Traore H., Fissette K., et al.
- Evaluation of Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis", Int J Tuberc Lung Dis, 3: 344-8.
- Mycobacterium tuberculosis pathogenesis and molecular determinants of virulence", Clin.
- WR, et al.
- Ethambutol resistance in Mycobacterium tuberculosis: critical role of embB mutations.
- Telenti A, Philipp WJ, Sreevatsan S, Bernasconi C, Stockbauer KE, Wieles B, et al..
- The emb operon, a unique gene cluster of Mycobacterium tuberculosis involved in resistance to ethambutol.
- Van Doorn Hr D.H.P., Kremer K, Vandenbroucke-Grauls Cm, Borgdorff Mw, Van Soolingen D Public health impact of isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis strains with a mutation at amino-acid position 315 of katG: a decade of experience in The Netherlands", Clin Microbiol Infect .
- World Health Organization (2011), Automated Real-time Nucleic Acid Amplification Technology for Rapid and Simultaneous Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance: Xpert MTB/RIF System