Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium.

- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - i - Hà Nội, 09/2013 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành bản luận văn này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS.
- Phạm Thị Lý Thu đã tận tình hướng dẫn và tạo mọi điều kiện giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và nghiên cứu.
- Hà Nội, ngày 26 tháng 9 năm 2013 Học viên Nguyễn Thị Hòa Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - ii - Hà Nội, 09/2013 KÝ HIỆU VIẾT TẮT ADN : Deoxirionucleic Acid Bt : Bacillus thuringensis CCC : Chiu cao cây.
- i chng FAO : Food and Agriculture Organization GMC : Genetically Modified Corn GMO : Genetically Modified Organism OD : Optical Density PCR : Polymerase Chain Reaction T-DNA : Transfer-DNA TGST : Th ng Ti-plasmid : Tumor-Including Plasmid Vir : virulence Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - iii - Hà Nội, 09/2013 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 B.
- 9 Hình 2.2 Quá trình chuyn T-ADN vào t bào thc vt.
- 46 Hình 3.2 Kt qu phân tích PCR gen Cry1A(c.
- 48 Hình 3.3 Kt qu phân tích PCR gen Cry1A(c.
- 48 Hình 3.4 Kt qu.
- hin din protein Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen kháng sâu th h T2.
- ca dòng ngô CH9.13.159.1 chuyn gen b.
- 53 Hình 3.6 So sánh mt s ch tiêu nông sinh hc chính ca các dòng ngô chuyn gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2 v i chn n gen.
- 55 Hình 3.7 Các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2 trng trong nhà i cách ly côn trùng.
- 56 Hình 3.9 Kt qu phân tích PCR gen Cry1A(c.
- 58 Hình 3.10 Kt qu phân tích PCR gen Cry1A(c.
- 58 Hình 3.11 Kt qu lai Southern blot các dòng ngô CH9 chuyn gen Cry1A(c) th h T3.
- 59 Hình 3.12 Kt qu.
- hin din protein Cry1A(c) trong các dòng ngô CH9 chuyn gen kháng sâu th h T3.
- 61 Hình 3.13.
- c thân trên lá và thân ca các dòng mang gen kháng sâu th h T3.
- 63 Hình 3.14 So sánh mt s ch tiêu nông sinh hc chính ca các dòng ngô CH9 chuyn gen kháng sâu Cry1A(c) th h T3 vi dòng ngi ch n gen.
- 64 Hình 3.15 Các dòng ngô CH9 mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T3 trng trong i cách ly côn trùng.
- 65 Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - iv - Hà Nội, 09/2013 DANH MỤC BẢNG Bng 1.1 Các ch th chn lc dùng cho bin np gen.
- 17 Bng 1.2 Các gen ch th sinh hóa.
- 18 Bng 2.1 Danh sách các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T1 s dng làm vt liu nghiên cu.
- 34 Bng 2.2 Trình t n mi s dng trong nghiên cu.
- 38 Bng 3.1 Kt qu PCR phân tích các dòng ngô chuyn gen T2.
- 47 Bng 3.2 Kt qu.
- hin din ca protein Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen kháng sâu th h T2.
- c ca các dòng ngô mang gen.
- 51 Bng t s c tính nông sinh hc chính ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2.
- 53 Bng 3.5 Các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2 s dng làm vt liu nghiên cu.
- 56 Bng 3.6 Kt qu PCR phân tích các dòng ngô chuyn gen T3.
- 57 Bng 3.8 Kt qu.
- hin din ca protein Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen kháng sâu th h T3.
- c thân ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T3.
- 62 Bng c tính nông sinh hc chính ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T3.
- 63 Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - v - Hà Nội, 09/2013 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN.
- 4 1.1 Ngun gc, vai trò và v trí ca cây ngô trong h thng cây trng.
- phân t ca vic chuyn gen thông qua Agrobacterium tumefaciens.
- 12 1.3 H thng vector bin np gen thông qua vi khun Agrobacterium tumefaciens vào t bào thc vt.
- 20 Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - vi - Hà Nội Mt s nghiên cu v gen Cry1A(c.
- 22 1.5 Thc trng nghiên cu và ng dng Công ngh Sinh hc trong chn to ging ngô.
- VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.
- 45 3.1 Kt qu tách chit ADN tng s t lá ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2.
- 45 3.2 Kt qu phân tích PCR s có mt ca gen Cry1A(c) trong các dòng ngô chuyn gen th h T2.
- hin din ca protein Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2.
- ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2 b.
- ng, phát tri c tính nông hc quan trng ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2.
- 53 3.6 Kt qu phân tích PCR s có mt ca gen Cry1A(c) trong các dòng ngô chuyn gen th h T3.
- 56 3.7 Phân tích Southern blot gen Cry1A(c) trong các dòng ngô chuyn gen th h T3.
- 58 Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - vii - Hà Nội, 09/2013.
- hin din ca protein Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T3.
- c thân ca các dòng ngô chuyn gen th h T3 u kin th sâu nhân t i cách ly.
- ng, phát tri c tính nông hc quan trng ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T3.
- 67 Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 1 - Hà Nội, 09/2013 MỞ ĐẦU Ngô (Zea mays L.) là m c quan trng nht trên th gii.
- nht v sng.
- Vi giá tr kinh t cao và kh thích ng rng c trng  hu h n tích trng ngô trên th git 174,64 triu ha vi tng st 838 triu t M.
- Ti Vi c quan trng th ng ch lc trong công cu c bit  các t din tích gieo trng ngô ca c t gn 1,2 triu ha vi sng 4,6 triu t t 40,09 t/ha (Tng cc th c ta vn phi nhp khu ngô vng khá ln, 1,614 triu t i tr.
- c ca B Nông nghi ng ngô ca Vit Nam ct 8  9 triu t.
- Tuy nhiên sn xu i mt vi tình hình sâu bnh dch hi n nay, rt nhiu loi thuc tr sâu hóa hc s dng.
- phòng tr sâu bnh vi chi phí tn kém, gây ô nhing c hi cho sc khi, v.
- ci thin tình hình này, nhng k thut tiên tin trong bo v cây trng nhm xây dng mt nn nông nghip sch, bn vng và c nghiên cu.
- Vic to ra các ging cây trng bi.
- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 2 - Hà Nội, 09/2013 Cây ngô chuyn din tích trng ngô bii gen t 55,1 triu ha chim 31,6% tng din tích trng ngô trên toàn th gii.
- n gen kháng sâu biu hin protein Cry có ngun gc t vi khun Bacillus thuringensis (Bt) chim khong 7,5 triu ha (4%) (James, 2012).
- tài: Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium.
- Mục tiêu nghiên cứu Cry1A(c T3.
- Nội dung nghiên cứu.
- Phân tích sinh hc phân t (PCR) gen kháng sâu Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen th h T2, T3.
- Phân tích sinh hc phân t (lai Southern blot) gen kháng sâu Cry1A(c) Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 3 - Hà Nội, 09/2013 trong các dòng ngô mang gen th h T2, T3.
- hin din ca protein Cry1A(c) trong các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2, T3.
- c thân ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2, T3 b.
- c thân ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2, T3 u kin lây nhim nhân t i cách ly côn trùng.
- ng, phát trin, cá c tính nông hc quan trng ca các dòng ngô mang gen kháng sâu Cry1A(c) th h T2, T3.
- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 4 - Hà Nội, 09/2013 CHƢƠNG I.
- Kt qu nghiên cng minh rng cây ngô có ngun gc  Trung M, trung tâm phát sinh là Mehico (Galinat, 1995).
- ng c chính (khong 85% sng ngô).
- ch u loi vitamin quan trng cho s sng.
- u quan trng trong công nghip ch bin thc phm Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 5 - Hà Nội, 09/2013.
- Tình hình sản xuất ngô trên thế giới và ở Việt Nam c trng c gia trên th gii tp trung  c M, Trung Quc, Braxin, Mehicô, Pháp và.
- ng ngô trên th gii.
- Trung Quc du vi 197,5 triu tn trên din tích trng trt là 34,95 triu ha.
- T c có din tích trng ngô ln nht là Indonesia (41.
- Vi c quan trng nht th c trng trong nhu kin sinh thái khác nhau trên nhiu vùng.
- Các thi v trng ngô ch y.
- t khong 1 tn/ha do trng các gi i k thut canh tác lc hu.
- Tuy nhiên, ngành sn xuc ta thc s có nhc tin nhy vt là t u nh n nay, gn lin vi vic không ngng m rng ging ngô lai ra sn xung thi ci thin các bin pháp k thu i ca ging mi.
- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 6 - Hà Nội n tích trng gi tr ng lm khong 95% trong s u hecta.
- n tích trng ngô trong nt gn 1,2 tri t khong 40,09 t/ ha và sng là 4,6 triu tn.
- t ra cho ngành sn xut ngô trên th gii nói chung và c ta nói riêng: (1) khí hu toàn cn bin rt phc tc bit là hn t và nhiu loi sâu bnh hi mi xut hin, (2) giá nhân công ngày càng cao, cnh tranh gay gt gia ngô và các cây trng khác, (3) tng ngô thc s chu h.
- u kin bt l t xu, chua phèn, thi gian sinh ng ngng th t cao i sn xut vnhiu.
- Khái quát tình hình sâu hại ngô ở Việt Nam Viu tra thành phn sâu hi ngô c ti min B n côn trùng, B Nông nghip t chc min Nam do Vin Bo v thc v ng dn liu quan trng v thành phn, phân b và m.
- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 7 - Hà Nội, 09/2013 Cho ti nay có kho.
- thy trong thi k cây non, mt thóc ch thy  thi k sp thu hoc li, có loài có th phá hi gn sut c thi k ng c c thân ngô phá hi t khi ngô 7-8 lá cho ti lúc thu hoch, sâu cn nõn phá hi t thi k cây con cho ti khi cây chín sáp.
- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 8 - Hà Nội Vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens và cơ chế chuyển gen vào thực vật 1.2.1 Giới thiệu chung về Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium tumefaciens là vi khun gây bnh cây s t, có kh m nhim thc vt, kích thích to khi u ngay ti các v a cây ch.
- Hoàn toàn khác vi mô và t bào thc vt bình ng, khi u do Agrobacterium tumefaciens sinh ra phát trin rt mnh ngay trong u kin thi Agrobacterium tumefaciens n mn T-ADN (Transfer ADN) sang t bào thc vt và T-u khin quá trình sinh tng hp các các ch i u ng hp các opin là các axit amin (amino acid-c bit là các dn xut cng.
- hong ca gen chuyn hóa opin trên plasmid gây khi u thc vt (Tumor inducing plasmid - Ti-plasmid) (Brock, 1991.
- chuyn các gen quan tâm vào thc vt nhm to cây trng mang nhng tính trng mong mun (Võ Th.
- Nghiên cứu đánh giá sự hiện diện và tính ổn định của gen chuyển trong các dòng ngô chuyển gen kháng sâu tạo ra thông qua vi khuẩn Agrobacterium Nguyễn Thị Hòa - 9 - Hà Nội c (VIRulence Region-vùng VIR), liên quan trc tip ti s hình thành khi u  thc v.
- Các protein VIR này có vai trò quan trng trong vic chuyn T-ADN sang t bào thc vt

Xem thử không khả dụng, vui lòng xem tại trang nguồn
hoặc xem Tóm tắt