Academia.eduAcademia.edu
Sản xuất rhEPO bằng Pichia pastoris Thực hiện: Lương Trung Nguyên Hướng dẫn: Trần Hà Lạc Đặt vấn đề Bệnh thiếu máu do thiếu EPO Nguyên nhân do suy thận hoặc khiếm khuyết gene epo Bắt buộc tiêm EPO thường xuyên và liên tục Giá thị trường cao (thuốc Retacrit trên thị trường có giá khoảng $50/mL) Làm sao để hạ giá thành sản xuất thuốc EPO? Sơ lược về EPO  Kích thước : 165 amino acids, 30 kDa.  Cần quá trình biến đổi sau dịch mã phức tạp.  Các biến đổi sau dịch mã cần cho hoạt tính và độ bền của EPO. Chọn chủng chủ Chi phí nuôi cấy thấp, không yêu cầu quá nghiêm ngặt Tính bền vững di truyền qua các thế hệ cao P. pastoris Khả năng biến dưỡng methanol và sử dụng methanol như chất cảm ứng Tăng sinh nhanh Tiết ra EPO ở dạng có hoạt tính, dễ thu nhận và tinh sạch Chọn vector Các tiêu chí để chọn vector Là vector con thoi, tồn tại được trong cả hai chủng E. coli và P. pastoris Có khả năng kiểm soát biểu hiện. Mức độ biểu hiện protein cao Plasmid pPICZ𝜶A Cấu trúc vector tái tổ hợp Thu nhận gene mục tiêu bằng phương pháp tổng hợp hoá học Kiểm tra kết quả bằng phản ứng PCR Cắt tạo đầu dính bằng EcoRI và XbaI Nối gene mục tiêu epo vào sản phẩm cắt Tạo dòng P. pastoris tái tổ hợp LB+Zeocin Gene epo Khuẩn lạc E. coli DH5𝜶 Phân tích bằng phản ứng PCR và giải trình tự YDB+Zeocin Gene epo Khuẩn lạc Gene epo P. pastoris Thu nhận và tinh sạch protein Tinh chế protein BMMY BMGY YDB+Zeocin CÁM ƠN QUÝ THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN