- Các phương pháp xác định. - Phương pháp cực phổ. - Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử. - Phương pháp phân tích dòng chảy (flow injection analysis – FIA). - Phương pháp điện di mao quản. - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. - Phương pháp sắc ký khí. - Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ. - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. - 202.1.2.1 Xây dựng phương pháp. - Ứng dụng phương pháp. - Phương pháp nghiên cứu. - Phương pháp tách chiết mẫu. - Nguyên tắc chung về phương pháp HPLC. - Đánh giá phương pháp phân tích. - Độ lặp lại và độ thu hồi của phương pháp. - Với những lí do trên, chúng tôi đã lựa chọn đề tài: “Xác định hóa chất bảo vệ thực vật carbamat trong một số loại rau quả bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS. - Xây dựng phương pháp xác định dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật carbamat trong rau quả, bao gồm. - Thẩm định phương pháp đã xây dựng. - Áp dụng phương pháp xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật carbamate để khảo sát một số mẫu rau quả trên địa bàn Hà Nội.. - Ortiz [12] đã xác định carbaryl và carbofuran bằng phương pháp cực phổ xung vi phân. - Phương pháp được ứng dụng xác định các mẫu nước sông. - Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử Các tác giả Urmila Tamrakar, Vinay K. - Pillai [32] đã xác định đồng thời 3 loại thuốc trừ sâu nhóm carbamat bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử. - Phương pháp đã được áp dụng để phân tích thuốc trừ sâu nhóm carbamat trên các mẫu rau, đất, thức ăn, nước … với hiệu suất thu hồi khoảng 95%. - Alvarez-Rodriguez [26] đã xác định thuốc trừ sâu carbamat như carbaryl, bendiocarb, carbofuran, methiocarb, promecarb và propoxur bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử tại bước sóng 510nm. - Giới hạn phát hiện của phương pháp trong khoảng 0,2 – 2mg/ml. - Phương pháp xác định carbosulfan bằng phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử đã được các tác giả Y.Koteswara Rao, K. - Độ thu hồi của phương pháp trên các mẫu nước uống, gạo và lúa mì đều trên 93%.. - Các phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử chỉ phân tích được một loại carbamat nào đó hoặc phân tích đồng thời một số carbamat. - Hơn nữa, phương pháp có độ nhạy kém. - Do đó, hiện nay phương pháp này rất ít được ứng dụng để phân tích carbamat. - García-Campana và cộng sự [23] đã phát triển phương pháp mới để xác định carbaryl trong thực phẩm thực vật và nước tự nhiên bằng kĩ thuật phân tích dòng chảy. - Đây là một phương pháp đơn giản, nhanh và dễ dàng kết hợp với phương pháp sắc ký lỏng để xác định đồng thời một số carbamat. - Một phương pháp xác định carbaryl bằng kĩ thuật phân tích dòng chảy sử dụng detector UV – Vis đã được các tác giả Karim D. - Phương pháp có giới hạn phát hiện 26,5ng/ml với tần suất bơm mẫu 110 lần/giờ. - Một phương pháp phân tích dòng chảy sử dụng detector huỳnh quang để xác định carbofuran đã được đề cập. - Phương pháp đã ứng dụng thành công xác định dư lượng carbofuran trong mẫu rau diếp.[24] Phương pháp phân tích dòng chảy có ưu điểm là nhanh, thiết bị phân tích dễ kiếm và rẻ tiền. - Tuy nhiên, phương pháp không thể xác định đồng thời các chất carbamat. - Do vậy, phương pháp cũng ít được ứng dụng để phân tích carbamat.. - Ling Wang và cộng sự [34] đã tách và xác định dư lượng thuốc trừ sâu carbamat bằng phương pháp điện di mao quản đẳng áp. - Phương pháp có giới hạn phát hiện từ 0,05 – 1,6mg/kg và hiệu suất thu hồi từ với độ lệch chuẩn RSD < 11,4%. - Phương pháp đã được áp dụng để xác định 10 loại carbamat trong một số loại rau.. - Xác định dư lượng fenoxycarb trong lúa mì bằng phương pháp điện di mao quản khô và phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. - Phương pháp HPLC sử dụng detector UV tại bước sóng. - Việc xác định các hóa chất bảo vệ thực vật bằng thiết bị này vẫn đang được nghiên cứu và chưa có nhiều loại thuốc trừ sâu được xác định bằng phương pháp này.. - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Tác giả Elvira Grou và cộng sự [16] đã xác định thuốc bảo vệ thực vật carbamat trong đất và nước bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng detector UV ở bước sóng 254nm. - Giới hạn phát hiện của phương pháp đối với mẫu nước từ µg/g, đối với mẫu đất từ 0,05 – 0,1µg/g.. - Tác giả Feng Tang và cộng sự [17] đã xác định dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamat trong sau bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao HPTLC tại 2 bước sóng. - Phương pháp có hiệu suất thu hồi từ tại nồng độ 1 – 5mg/kg. - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng detetor huỳnh quang xác định đồng thời các chất carbamat như aldicarb, propoxur, carbofuran, carbaryl và methiocarb trong mật. - Phương pháp có giới hạn phát hiện thấp từ 4 – 5ng/g và độ thu hồi tương đối cao từ ứng với nồng độ từ 50 – 200ng/g.[18]. - Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao là một phương pháp thông dụng để xác định các hợp chất hữu cơ. - Phương pháp này đã được ứng dụng để xác định đồng thời các chất carbamat. - Xác định ethylcarbamat trong đồ uống bằng phương pháp sắc ký khí với detector bắt điện tử và sắc ký khí khối phổ. - Giới hạn phát hiện của phương pháp thấp, khoảng 5µg/kg đối với detector ECD và 0,5µg/kg đối với detector MS.[14] Xác định thuốc trừ sâu carbamat và nhóm nito hữu cơ trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ. - Sau đó, mẫu được xác định bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ. - Giới hạn phát hiện của phương pháp thấp từ 0,01 – 0,1µg/ml. - [27] Xác định đa dư lượng thuốc trừ sâu trong nước táo bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ. - [33] Phương pháp sắc ký khí đã được ứng dụng rộng rãi để xác định các hóa chất bảo vệ thực vật như các chất clo hữu cơ, lân hữu cơ, pyrethroid và carbamat. - Tuy nhiên phương pháp chỉ phân tích được những chất dễ bay hơi, còn các chất khó bay hơi thì phải tạo dẫn xuất nên tốn thời gian và hóa chất. - Do vậy, phương pháp ít được ứng dụng để phân tích carbamat. - Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ Gianni Sagratini và cộng sự [19] đã xác định dư lượng thuốc trừ sâu carbamat và phenylure trong một số loại quả bằng phương pháp vi chiết pha rắn và sắc ký lỏng khối phổ. - Giới hạn định lượng của phương pháp từ µg/ml, tùy thuộc từng chất. - Phương pháp đã được ứng dụng để xác định thuốc trừ sâu trong các mẫu quả.. - Xác định đồng thời hóa chất bảo vệ thực vật nhóm carbamat và lân hữu cơ trong rau quả bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ. - Phương pháp đã được ứng dụng để xác định thuốc trừ sâu trong rau quả. - Tuy nhiên, tất cả các nồng độ thuốc trừ sâu tìm thấy đếu thấp hơn giới hạn cho phép.[29] Xác định dư lượng carbamat trong rau quả bằng phương pháp khuếch tán trên nền pha rắn và sắc ký lỏng khối phổ. - Giới hạn phát hiện của phương pháp từ mg/kg, thấp hơn giới hạn cho phép của châu Âu từ 10 – 100 lần. - Phương pháp được ứng dụng để xác định carbamat trong các mẫu rau quả tại các chợ ở Valencian.[30] Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ là một kĩ thuật mới được phát triển trong những năm gần đây. - Về cơ bản, nó là phương pháp sắc ký lỏng sử dụng bộ phận phát hiện là detector khối phổ. - Phương pháp này tuy mới ra đời nhưng nó được ứng dụng rộng rãi để phân tích đồng thời các thuốc trừ sâu đặc biệt là nhóm carbamat. - Phương pháp có thể phân tích đồng thời từ hàng chục đến hàng trăm các loại thuốc trừ sâu khác nhau. - Phương pháp có nhiều ưu điểm như độ chọn lọc cao, giới hạn phát hiện thấp, thời gian phân tích nhanh, có thể định lượng đồng thời các chất có thời gian lưu giống nhau mà phương pháp sắc kí lỏng thường không làm được. - Với những ưu điểm trên, chúng tôi đã chọn phương pháp sắc kí lỏng khối phổ để nghiên cứu xác định đồng thời các chất carbamat.. - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. - 2.1.2.1 Xây dựng phương pháp · Khảo sát phương pháp bao gồm. - Điều kiện tách chiết mẫu · Điều kiện chạy máy · Thẩm định phương pháp:. - Áp dụng phương pháp mới xây dựng để xác định tồn dư thuốc bảo vệ thực vật họ carbamat trong một số loại rau và quả trên địa bàn Hà Nội.. - Phương pháp nghiên cứu 2.2.1. - Phương pháp tách chiết mẫu Đối tượng mẫu phân tích trong luận văn này là các loại rau củ, có nền mẫu phức tạp. - Thông thường, phương pháp này sử dụng hai pha lỏng không trộn lẫn. - Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ 2.2.2.1. - Dưới đây là hai phương pháp ion hóa được sử dụng trên thiết bị Finnigan LCQDUO:. - Trong phương pháp sắc kí lỏng khối phổ, pha động không chỉ ảnh hưởng tới quá trình tách các chất mà nó còn ảnh hưởng tới quá trình ion hóa và tín hiệu của chất phân tích. - Nhận xét: Sử dụng pha động là acid focmic 0,1% cho diện tích pic cao nhất, tăng độ nhạy của phương pháp. - Trong phương pháp nghiên cứu, pha tĩnh sử dụng là cột C18, ít phân cực nên pha động phải là hệ dung môi phân cực. - Đánh giá phương pháp phân tích 3.2.1. - Lập đường chuẩn là một trong những yêu cầu đầu tiên của phương pháp phân tích. - Độ lặp lại và độ thu hồi của phương pháp Một phương pháp phân tích tốt phải có độ lặp lại và hệ số thu hồi cao. - Độ lặp lại của phương pháp được xác định theo các đại lượng S2 và CV.. - Độ thu hồi của phương pháp theo các công thức sau. - Kết quả độ lặp lại và độ thu hồi của phương pháp. - Theo AOAC, độ lặp lại của phương pháp CV. - Như vậy, phương pháp có độ thu hồi trên 80% và độ lặp lại cao, có thể áp dụng phương pháp để phân tích dư lượng thuốc trừ sâu carbamat trong rau quả.. - KẾT LUẬN Trên cơ sở các kết quả thực nghiệm đã nghiên cứu để xác định dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật nhóm carbamat trong một số loại rau quả bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ, chúng tôi đã thu được các kết quả sau:. - Nghiên cứu và đánh giá được khoảng tuyến tính, giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng của các carbamat, độ lặp lại và độ thu hồi của phương pháp. - Đưa ra quy trình phân tích xác định đồng thời dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật nhóm carbamat trong một số loại rau quả bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ. - Đây là một phương pháp có nhiều ưu điểm trong phân tích các chất nhóm carbamat mặc dù chi phí cho phân tích còn khá cao. - Phạm Luận, Trần Chương Huyến, Từ Vọng Nghi (1990), Một số phương pháp phân tích điện hóa hiện đại, ĐHTH Hà Nội.