- NGHIÊN CỨU XẠ KHUẨN SINH KHÁNG SINH KHÁNG VI KHUẨN GÂY BỆNH LẬU. - Căn nguyên gây bệnh lậu là do vi khuẩn lậu, Gram. - có tên khoa học là Neisseria gonorrhoeae, được Neisser mô tả năm 1879, Leistikow và Loeffler nuôi cấy lần đầu tiên trên môi trường nhân tạo năm 1882.. - Vi khuẩn lậu, ngoài gây viêm niệu đạo vi khuẩn còn có khả năng gây viêm kết mạc nhất là viêm kết mạc mắt trẻ sơ sinh, gây ra viêm khớp, hội chứng Reiter và những biến chứng ngoài tiết niệu sinh dục. - Ở nước ta cũng như một số nước đang phát triển, việc sử dụng thuốc kháng sinh trong điều trị bệnh lậu rất tùy tiện. - Điều này đã làm gia tăng tính kháng thuốc của vi khuẩn lậu, không những với nhóm kháng sinh thế hệ cũ mà còn gia tăng nhanh chóng cả với nhóm kháng sinh mới được sử dụng trong điều trị. - Chính vì vậy, việc tìm kiếm những chất kháng sinh mới, nhất là những chất kháng sinh có nguồn gốc tự nhiên, thay thế dần các chế phẩm có nguồn gốc hóa học để sử dụng trong điều trị bệnh là rất cần thiết.. - Chủng nghiên cứu: 150 chủng xạ khuẩn lưu giữ ở Bảo tàng Giống Vi sinh vật. - Chủng kiểm định: Vi khuẩn gây bệnh lậu (Neisseria gonorrhoeae) do Viện Da liễu Quốc gia cung cấp. - Môi trường nuôi cấy cho phân loại: ISP-4, Yeast-malt agar, Oatmeal agar, Salts- starch agar, Glycerol-asparagine agar [8].. - Môi trường nuôi dịch thể: Khoai tây, Tinh bột- cao nấm men, nước chiết đậu tương, Gauze [1].. - Môi trường nuôi vi khuẩn kiểm định:. - Xác định hoạt tính kháng sinh: sử dụng phương pháp khuếch tán trên thạch [1].. - Nghiên cứu đặc điểm sinh học và phân loại. - Đặc điểm hình thái, nuôi cấy, sinh lý và sinh hóa: theo mô tả trong khóa phân loại của Shirling &. - Xác định trình tự ADN. - Tách chiết, khuếch đại và xác định trình tự ADNr 16S theo quy trình của Sakiyama và cộng sự [7]. - Dùng kít ABI Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit để khuếch đại mẫu, đọc trình tự trên thiết bị đọc trình tự tự động 3100 Avant. - Trình tự ADNr 16S của chủng D114 được phân tích bởi phần mềm CLUSTAL X [10]. - Trình tự tham khảo được lấy từ dữ liệu của DDBJ, EMBL, GenBank.. - -Nghiên cứu các điều kiện nuôi cấy:. - môi trường, pH, nhiệt độ, thời gian nuôi cấy thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng sinh.. - Tuyển chọn xạ khuẩn có khả năng kháng vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae. - Nuôi 150 chủng xạ khuẩn trên môi trường ISP-4 dịch thể, lắc 200 vòng/phút, nhiệt độ 28 o C trong 5 ngày. - Xác định khả năng kháng với vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae.. - Khả năng kháng vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae của 150 chủng xạ khuẩn. - Khả năng kháng vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae. - Kết quả bảng 1 cho thấy số lượng chủng xạ khuẩn có khả năng kháng vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae chiếm 22. - Chủng xạ khuẩn D114 có hoạt tính kháng Neisseria gonorrhoeae mạnh (D-d = 27 mm) được lựa chọn cho các nghiên cứu các đặc điểm phân loại và nuôi cấy.. - Phân loại chủng xạ khuẩn D114. - Các đặc điểm hình thái, sinh lý và sinh hóa - Đặc điểm hình thái: Chủng xạ khuẩn được nuôi trên môi trường ISP-4 sau 5 ngày, quan sát dưới kính hiển vi quang học:. - Cuống sinh bào tử của chủng D114 có dạng thẳng hoặc lượn sóng, chứa 20-100 bào tử trên cuống (Hình 1).. - Đặc điểm nuôi cấy: Chủng xạ khuẩn D114 sinh trưởng tốt trên các môi trường ISP-2, ISP-3, ISP-4 và ISP-5 sau 3 ngày.. - So sánh với bản mô tả xạ khuẩn của Shirling. - Gottlieb, chủng D114 có các đặc điểm tương đồng nhiều nhất với loài Streptomyces sindenensis [8]. - Để khẳng định chắc chắn, chúng tôi tiến hành xác định trình tự ADNr 16S của chủng D114 và so sánh với các loài đã biết.. - Phân tích trình tự ADNr 16S. - ADN genom của chủng D114 được tách chiết và sử dụng làm khuôn để khuếch đại đoạn ADNr 16S bằng phản ứng PCR. - Trình tự 1500 nucleotit của ADNr 16S được xác định trên máy đọc trình tự 3100-Avant Genetic Analyzer. - Cây phát sinh chủng loại của chủng D114 với 22 loài thuộc chi Streptomyces đã được xây dựng dựa vào trình tự ADNr 16S.. - Quan sát cây phát sinh chủng loại cho thấy: Chủng D114 nằm gần vị trí phân loại với các loài Streptomyces parvus, S.. - So sánh độ tương đồng của trình tự ADNr 16S giữa chủng. - 11 Chúng tôi tiến hành so sánh các đặc điểm hình thái và sinh lý, sinh hóa của chủng D114 với các loài Streptomyces parvus, S.. - Từ kết quả của các đặc điểm hình thái và sinh lý, sinh hóa kết hợp với trình tự ADNr. - 16S, có thể khẳng định chủng D114 thuộc loài Streptomyces sindenensis. - Để khẳng định chất kháng sinh do chủng D114 sinh ra có phải là actinomycin- D hay không, cần phải thực hiện các nghiên. - Hình dạng khuẩn lạc và cuống sinh bào tử của chủng xạ khuẩn D114. - Đặc điểm sinh lý, sinh hóa của chủng xạ khuẩn D114. - Đặc điểm Chủng D114. - Khả năng chịu muối. - Khả năng đồng hóa đường Đối chứng âm. - Vị trí phân loại của chủng xạ khuẩn D114 với các loài có quan hệ họ hàng gần dựa vào trình tự ADNr 16S. - Lựa chọn các điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng sinh của chủng xạ khuẩn D114. - Tiến hành nuôi cấy lắc 200 vòng/phút chủng xạ khuẩn trên các môi trường (đậu tương, YS, ISP-4, khoai tây, Gauze). - Sau 5 ngày, sinh khối cao nhất trên môi trường YS, ISP-4 và đậu tương, vòng kháng trên môi trường đậu tương (hình 4). - Kết quả cho thấy chủng D114 có khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp kháng sinh kháng vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae cao nhất trên môi trường đậu tương, pH -7, nhiệt độ 28 0 C, thời gian nuôi cấy từ 4 - 7 ngày (Hình 3).. - Trong số 150 chủng xạ khuẩn lưu giữ ở Bảo tàng Vi sinh vật, có 22% số lượng chủng có khả năng kháng vi khuẩn Neisseria gonorrhoeae.. - Chủng D114 có hoạt tính cao nhất, được định tên là Streptomyces sindenensis dựa vào các đặc điểm hình thái và sinh lý, sinh hóa kết hợp với trình tự ADNr 16S.. - Khả năng sinh trưởng và sinh tổng hợp chất kháng sinh kháng Neisseria gonorrhoeae cao nhất của chủng D114 trên môi trường đậu tương, pH -7, nhiệt độ 28 0 C, thời gian nuôi cấy từ 4 - 7 ngày.. - Các điều kiện nuôi cấy thích hợp cho sinh tổng hợp chất kháng sinh của chủng xạ khuẩn D114. - 1 - Chủng D114. - Khả năng kháng vi khuẩn lậu của các chủng nghiên cứu. - Lê Văn Hưng (2008), "Sự kháng kháng sinh của các chủng vi khuẩn lậu phân lập được tại Viện Da liễu Quốc gia năm. - Môi trường. - Study on antibiotic-producing Streptomyces against Neisseria gonorrhoeae Dao Thi Luong, Le Ha Long Hai, Tran Le Quyen. - Institute of Microbiology and Biotechnology, Vietnam National University, Hanoi Among 150 actinomyces strains stored at Vietnam Type Collected Culture, the strain D114 which showed the highest activity against Neisseria gonorrhoeae was chosen for this study.