- KHẢO SÁT KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP IAA VÀ CỐ ĐỊNH ĐẠM CỦA VI KHUẨN GLUCONACETOBACTER SP.. - VÀ AZOSPIRILLUM SP. - The ability of synthesis of Indole Acetic acid (IAA) and N-fixing of Gluconacetobacter sp.. - and Azospirillum sp. - Among 12 strains of Azospirillum sp. - and 14 strains of Gluconacetobacter sp. - Keywords: biofertilizer, Gluconacetobacter sp., Azospirillum sp., N-fixing, IAA. - Title: Investigation of the ability of synthesis of Indole Acetic acid (IAA) and N-fixing of Gluconacetobacter sp. - Khảo sát khả năng sinh tổng hợp indol acetic acid (IAA) và cố định đạm của vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - và Azospirillum sp. - Trong số 12 dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - và 14 dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - đã được khảo sát thì có 2 dòng vi khuẩn A1 và G10 vừa có khả năng tổng hợp IAA vừa có khả năng cố định đạm đạt ở mức cao. - Từ khóa: phân vi sinh, Gluconacetobacter sp., Azospirillum sp., cố định đạm, IAA. - Để khắc phục những hạn chế trên của phân hóa học thì việc sử dụng phân sinh học có chứa các dòng vi khuẩn có khả năng cố định đạm và kích thích tăng trưởng cho cây trồng như indole acetic acid là một trong những biện pháp có hiệu quả tiết kiệm chi phí sản xuất mà chất lượng và năng suất vẫn tăng.. - Vi khuẩn Azospirillum sp. - thuộc chi Rhodosprillales, được biết là những vi khuẩn gram âm, có hình dạng thể xoắn, hơi cong như hình dấu phẩy hoặc dạng xoắn khuẩn, chiều dài khoảng 2,0–3,8 µm và chiều rộng khoảng 1,0–1,5 µm, sinh trưởng tốt ở 30 0 C.. - Gluconacetobacter diazotrophicus là vi khuẩn nội sinh trên cây mía. - Đây là loại vi khuẩn gram âm, hiếu khí bắt buộc, chống chịu với axít, nồng độ muối và đường cao (Boddey et al., 1991). - Việc nghiên cứu khảo sát các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - Để chọn được dòng vi khuẩn có khả năng tổng hợp IAA và NH 4. - nghiên cứu đã tiến hành khảo sát 12 dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - và Dobereiner, 1988) được sử dụng để nuôi vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - và môi trường NFb lỏng nuôi vi khuẩn Azospirillum sp. - Để nguội, chủng 1ml vi khuẩn gốc, thí nghiệm lặp lại 3 lần. - Nuôi các dòng vi khuẩn trên máy lắc 200 vòng/phút, trùm kín các ống nghiệm trong bọc nylon đen để tránh IAA sinh ra bị phân hủy bởi ánh sáng. - Định lượng đạm và IAA do vi khuẩn tổng hợp được qua các ngày 2, 4, 6 (sau khi chủng).. - Hút cẩn thận 1ml phần dịch trong vi khuẩn sau khi ly tâm cho vào các ống duharm.. - Kết quả đo OD của các dòng phân lập được thay vào phương trình đồ thị đường chuẩn (Hình 1), từ đó suy ra được nồng độ IAA của các dòng.. - Hút 1 ml dịch vi khuẩn đã ly tâm và thêm 4 ml H 2 O. - Kết quả đo OD của các dòng phân lập được. - thay vào phương trình đồ thị đường chuẩn (Hình 2), từ đó suy ra được nồng độ NH 4 + của các dòng.. - Kết quả cho thấy tất cả 26 dòng vi khuẩn đều có khả năng tổng hợp ra lượng IAA.. - Khả năng tổng hợp IAA của các dòng vi khuẩn nhìn chung tổng hợp đạt lượng ít ở ngày thứ 2, đạt đến đỉnh cao vào ngày thứ 4 và bắt đầu giảm vào ngày thứ 6.. - Khả năng tổng hợp IAA của các dòng vi khuẩn Azospirillum sp.. - Ở ngày thứ 2, dòng A1 và A3 tổng hợp IAA cao hơn so với các dòng Azospirillum sp. - Đến ngày thứ 4 tăng ở mức cao lần lượt là 17,748 µg/ml. - Vào ngày thứ 6 có khuynh hướng giảm nhẹ do môi trường ít dinh dưỡng hơn so với các ngày trước. - So với kết quả nghiên cứu của Bùi Việt Sang (2008) dòng vi khuẩn Azospirillum lipoferum R8b2 cũng tổng hợp được lượng IAA cao nhất vào ngày thứ 4 là 11,8 µg/ml, Dương Thị Kim Loan (2009) đo IAA của các dòng vi khuẩn phân lập từ ruộng lúa thì có dòng OM8c1 là 15,358 µg/ml thì các dòng vi khuẩn này đạt hàm lượng IAA cao hơn.. - Bảng 1: Hàm lượng IAA do các dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - tổng hợp Vi Khuẩn Hàm lượng IAA g/ml. - Như vậy, dòng A1 và A3 có khả năng tổng hợp IAA cao nhất trong các dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - được khảo sát vào ngày thứ 4 (khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các dòng khác ở cùng thời điểm) (Bảng 1).. - Khả năng tổng hợp IAA của các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp.. - Tương tự các dòng vi khuẩn Azospirillum sp., các dòng Gluconacetobacter sp.. - cũng có khả năng tổng hợp IAA tốt nhất ở ngày 4. - Sau khi chủng 2 ngày thì các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - đã tổng hợp IAA nhưng lượng IAA không cao. - Nhưng đến ngày 4 thì khả năng tổng hợp IAA tăng cao và có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê ở mức 5% qua kiểm định (Bảng 2). - Dòng vi khuẩn G8, G9, G10 có khả năng tổng hợp IAA cao nhất vào ngày thứ 4 với lượng IAA lần lượt là 2,938 µg/ml. - Vào ngày thứ 6 khả năng tổng hợp IAA giảm rõ rệt và có sự khác biệt giữa các dòng vi khuẩn. - Như vậy, 3 dòng vi khuẩn G8, G9, G10 có khả năng tổng hợp IAA mạnh nhất trong các dòng Gluconacetobacter sp. - được khảo sát vào ngày thứ 4.. - Bảng 2: Hàm lượng IAA do các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - tổng hợp. - Vi khuẩn Hàm lượng IAA g/ml. - Kết quả cho thấy tất cả 26 dòng vi khuẩn đều có khả năng tổng hợp ra lượng NH 4. - Khả năng cố định đạm của các dòng vi khuẩn Azospirillum sp.. - Sau hai ngày chủng vi khuẩn, 12 dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - được khảo sát đều có khả năng tổng hợp lượng NH 4 + nhưng nồng độ còn thấp. - Sau đó, các dòng vi khuẩn bắt đầu tăng hoạt động cố định đạm, lượng NH 4 + được tổng hợp tiếp tục tăng dần và đạt nồng độ cao nhất vào ngày thứ 4. - Ngày thứ 6, lượng NH 4 + giảm.. - Trong 12 dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - được khảo sát, có 2 dòng A1 và dòng A6 tổng hợp NH 4 + cao nhất ở ngày thứ 4. - Bảng 3: Hàm lượng NH 4 + do các dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - Vi khuẩn Hàm lượng NH 4 + g/ml. - Ở ngày 2, dòng vi khuẩn A1 tổng hợp NH 4 + khác biệt có ý nghĩa thống kê ở mức 5% qua kiểm định so với các dòng vi khuẩn khác với lượng NH 4 + là 2,653 g/ml.. - Các dòng vi khuẩn bắt đầu tăng hoạt động cố định đạm vào ngày thứ 4. - Dòng A1 và A6 tổng hợp NH 4 + tăng đáng kể vào ngày thứ 4 với lượng NH 4 + lần lượt là 8,09. - Khi so với kết quả của Dương Thị Kim Loan (2009) khảo sát khả năng cố định đạm của dòng OM4a1 được phân lập từ ruộng lúa là 2,064 mg/l thì kết quả này khả quan hơn. - Các dòng còn lại đều có lượng. - NH 4 + tăng hơn so với ngày 2 nhưng giữa các dòng không có sự khác biệt đáng kể.. - Vào ngày thứ 6 lượng NH 4 + có khuynh hướng giảm mạnh do môi trường không còn đủ dinh dưỡng.. - Như vậy, ngày thứ 4 là thời gian tổng hợp NH 4 + cao nhất, có thể so sánh khả năng tổng hợp NH 4 + tốt nhất giữa các dòng. - Trong đó dòng vi khuẩn A1 và A6 có khả năng tổng hợp NH 4 + cao nhất so với các dòng còn lại.. - Khả năng cố định đạm của các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp.. - Sau hai ngày chủng vi khuẩn, tất cả 14 dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - được khảo sát đều có khả năng tổng hợp NH 4 + nhưng nồng độ còn thấp. - Ngày thứ 6, lượng NH 4. - Ở ngày 2 các dòng vi khuẩn tổng hợp NH 4 + còn thấp. - Tương tự các dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - được khảo sát ở trên. - Khả năng tổng hợp NH 4 + của các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - tăng mạnh rõ rệt vào ngày thứ 4. - Trong đó 3 dòng G10, G11, G12 tổng hợp NH 4 + cao khác biệt có ý nghĩa thống kê ở mức 5% qua kiểm định so với các dòng vi khuẩn còn lại với lượng NH 4 + ở mức cao nhất lần lượt là 8,772 g/ml. - Vào ngày thứ 6 lượng NH 4 + giảm mạnh do môi trường nuôi không còn nhiều dinh dưỡng nên khả năng tổng hợp NH 4 + của những dòng vi khuẩn này giảm đáng kể.. - Như vậy, 3 dòng G10, G11, G12 có khả năng tổng hợp NH 4 + cho lượng NH 4 + cao nhất vào ngày thứ 4.. - Bảng 4: Hàm lượng NH 4 + do các dòng vi khuẩn Gluconacetobacter sp. - Tất cả các dòng vi khuẩn Azospirillum sp. - và Gluconacetobacter sp. - được khảo sát đều có khả năng tổng hợp IAA và NH 4. - và đạt hàm lượng cao nhất vào ngày thứ 4. - đã khảo sát thì dòng vi khuẩn tổng hợp được IAA đạt lượng cao là: A1 (17,748 µg/ml). - Các dòng vi khuẩn tổng hợp NH 4 + ở mức cao là: A1 (8,098 µg/ml). - Như vậy, dòng A1 và G10 là 2 dòng vi khuẩn vừa có khả năng tổng hợp IAA vừa có khả năng tổng hợp NH 4 + đạt hàm lượng cao có triển vọng hướng tới sản xuất phân đạm sinh học cho cây mía.. - Tiến hành đánh giá 2 dòng vi khuẩn trên bằng thí nghiệm ngoài đồng.. - Phân lập và xác định khả năng tổng hợp Indole-3- acetic acid (IAA) của một số dòng vi khuẩn Pseudomonas sp. - Khả năng cố định đạm tự do trên đất phù sa và đất phèn trồng lúa