- Nghiên cứu được thực hiện nhằm tìm hiểu ảnh hưởng của việc bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà (IgY) lên khả năng kháng Vibrio parahaemolyticus, tác nhân gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính (Acute hepatopancreatic necrosis disease - AHPND) trên tôm thẻ chân trắng. - Nghiên cứu đánh giá các chỉ tiêu miễn dịch và tỉ lệ sống của tôm sau khi thí nghiệm cảm nhiễm. - Thí nghiệm bao gồm 4 nghiệm thức: đối chứng âm. - nghiệm thức IgYA 0,5% và nghiệm thức IgYB 0,5%. - Kết quả thí nghiệm ghi nhận tỉ lệ chết tích lũy của tôm ở nghiệm thức đối chứng âm (1,11%) và tôm ở nghiệm thức IgYB thấp nhất và khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05) so với nghiệm thức đối chứng dương (52,22%) và nghiệm thức bổ sung IgYA . - Một số chỉ tiêu miễn dịch của tôm bao gồm tổng tế bào máu, định loại bạch cầu và hoạt tính phenoloxidase ở nghiệm thức bổ sung IgYB 0,5% gia tăng khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05) so với các nghiệm thức còn lại. - Tóm lại, chế độ cho ăn có bổ sung IgYB 0,5% giúp cải thiện tỉ lệ sống và tăng cường miễn dịch ở tôm thẻ chân trắng khi cảm nhiễm với V. - Lightner et al., 2012. - Tran et al., 2013). - Schryver et al., 2014).. - Gan et al., 2015).. - Tôm thẻ chân trắng dùng cho thí nghiệm cảm nhiễm được nuôi trong thời gian 5 tuần ở điều kiện như sau: tôm thẻ chân trắng (0,43 g/tôm) được xác định không nhiễm white spot syndrome virus WSSV và V. - Tôm được cho ăn thức ăn có bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà trong thời gian 5 tuần, bao gồm: nghiệm thức đối chứng không bổ sung IgY, nghiệm thức bổ sung IgYA 0,5%, nghiệm thức bổ sung IgYB 0,5%. - parahaemolyticus (CM5) dùng cho thí nghiệm cảm nhiễm được chọn từ bộ sưu tập mẫu bệnh của Bộ môn Bệnh học Thủy sản, Khoa Thủy sản, Trường Đại học Cần Thơ. - Vi khuẩn được nuôi tăng sinh trong môi trường nutrient broth (NB, Merck) có bổ sung 1,5% NaCl, ủ ở 28C trong 16. - 2.2 Thí nghiệm cảm nhiễm. - Tôm thẻ chân trắng được cho ăn thức ăn có hoặc không bổ sung IgYA và IgYB (0,5%) trong thời gian 5 tuần, sau đó được cảm nhiễm với vi khuẩn V.. - Tôm ở các nghiệm thức được giữ ổn định 1 ngày trước khi cảm nhiễm với số lượng 30 con/bể.. - Thí nghiệm cảm nhiễm bao gồm 4 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần. - Trong đó, nghiệm thức 1 (NT1- đối chứng âm) tôm không bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà và không cảm nhiễm V. - nghiệm thức 2 (NT2- đối chứng dương) tôm không bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà và cảm nhiễm V.. - nghiệm thức 3 (NT3) tôm bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà IgYA 0,5% và cảm nhiễm V. - nghiệm thức 4 (NT4) tôm bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà IgYB 0,5%. - và cảm nhiễm V. - Tôm sau khi cảm nhiễm tiếp tục được bổ sung IgYA 0,5% và IgYB 0,5% tương ứng với theo từng nghiệm thức và cho ăn theo nhu cầu. - Tôm thẻ chân trắng sau 3 ngày cảm nhiễm được thu với số lượng 9 tôm/nghiệm thức để phân tích các chỉ tiêu huyết học và hoạt tính PO. - Sau đó các ống mẫu được bổ sung 50 µL dung dịch Trypsin hoặc 50 µL đệm Cacodylate buffer (ống đối chứng). - Sự khác biệt giữa các nghiệm thức được so sánh theo phương pháp phân tích ANOVA một nhân tố bằng phép thử Duncan thông qua phần mềm SPSS 20.0 ở mức ý nghĩa (p<0,05).. - 3.1 Ảnh hưởng của việc bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà lên tỉ lệ sống của tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) sau cảm nhiễm với V.. - Tôm thẻ chân trắng được cho ăn thức ăn bổ sung IgYA, IgYB (0,5%) trong thời gian 5 tuần và cảm nhiễm với vi khuẩn V. - Kết quả thí nghiệm cho thấy tôm ở nghiệm thức đối chứng âm (NT1) không bổ sung IgY và không cảm nhiễm với vi khuẩn V.. - parahaemolyticus có tỉ lệ chết là 1,11% cho đến khi kết thúc thí nghiệm, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p<0,05). - Tôm ở nghiệm thức này hoạt động bình thường, gan tụy sẫm màu và ruột đầy thức ăn. - Ở các nghiệm thức tôm cảm nhiễm với V. - parahaemolyticus (NT2 không bổ sung IgY, NT3 bổ sung IgYA 0,5%, NT4. - bổ sung IgYB 0,5%) xuất hiện tôm chết ở ngày thứ 1 sau khi cảm nhiễm và ngưng chết ở các ngày thứ 5, 6, 7 lần lượt ở NT4, NT3, NT2. - NT4 (bổ sung IgYB 0,5%) có tỉ lệ chết tích lũy thấp nhất trong các nghiệm thức cảm nhiễm với vi khuẩn V.. - parahaemolyticus và khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p<0,05). - Ngoài ra, trong ngày thứ 2, 3 sau khi cảm nhiễm ở nghiệm thức không bổ sung IgY (NT2) có số lượng tôm chết nhiều hơn so với các nghiệm thức còn lại và kéo dài cho đến ngày thứ 7. - Trong khi đó, tôm ở các nghiệm thức bổ sung IgY và cảm nhiễm với vi khuẩn thì có số lượng tôm chết ít và thời gian chết ngắn hơn (Hình 1).. - Hình 1: Biểu đồ tỉ lệ chết tích lũy của tôm thẻ chân trắng trong 14 ngày cảm nhiễm với V.. - Giếng 1: mẫu của nghiệm thức đối chứng không bổ sung IgY cảm nhiễm với V.. - Giếng 2-3: mẫu của các nghiệm thức 3,4 bổ sung IgY và cảm nhiễm với V. - Kết quả thí nghiệm trên cho thấy bổ sung IgY vào thức ăn có khả năng giúp tôm tăng cường sức đề kháng với vi khuẩn gây bệnh hoại tử gan tụy cấp tính V. - parahaemolyticus, trong đó tôm ở nghiệm thức bổ sung IgYB 0,5% có tỉ lệ chết thấp nhất trong suốt thời gian cảm nhiễm. - Tôm thẻ chân trắng ở các giai đoạn zoea, mysis và postlarvae được cho ăn bổ sung 1,5% IgY có chứa kháng thể kháng đặc hiệu V. - (mysis), 38,0% (postlarva) sau 48 giờ cảm nhiễm với V. - Nhóm tôm cảm nhiễm với V.. - Khi bổ sung IgY đặc hiệu với V. - Đồng thời, tỉ lệ chết của chuột sau khi kết thúc thí nghiệm cảm nhiễm với V.. - vulnificus là 87% so với nhóm đối chứng chết 100% sau 3 ngày cảm nhiễm (Neema et al., 2012). - Nghiên cứu của Kim et al. - (2004) cho thấy tôm thẻ Trung Quốc (Penaeus chinensis) cho ăn bổ sung IgY được tổng hợp từ gen VP28 và gen VP19 có thể giúp tôm kháng lại với WSSV thông qua kết quả ghi nhận được tỷ lệ chết tương ứng là 50%, 15% và 17% khi bổ sung IgY với nồng độ 0,001 mg/μL, 0,1 mg/μL và 0,5 mg/μL, trong khi nhóm đối chứng chết 100%.. - Lu et al. - (2008) ghi nhận tôm đất (Metapenaeus ensis) được tiêm bổ sung IgY (kích thích bởi vaccine WSSV-DNA được tạo ra từ tổ hợp gen VP28, VP19 và VP15) có tỉ lệ chết là 66,7%. - Tương tự, việc bổ sung trên tôm hùm nước ngọt (Procambius clarkiaii) bằng các phương pháp tiêm, cho ăn, ngâm đều có hiệu quả trong việc bảo vệ tôm kháng lại WSSV. - Đặc biệt, bổ sung IgY bằng phương pháp ngâm được áp dụng nhiều vào thực tế.. - Việc bổ sung vaccine WSSV-DNA ghi nhận nghiệm thức tiêm 100 µL/tôm có tỉ lệ chết là 20% sau 7 ngày, nghiệm thức cho ăn có tỉ lệ chết 1%, 10% sau 10 ngày và nghiệm thức ngâm ở liều lượng 100. - 53,3%, và 46,7% (Lu et al., 2009). - Ngoài ra, nghiên cứu sử dụng thảo dược Asparagus racemosus như chất bổ trợ khi bổ sung kháng thể IgY cho tôm sú (Penaeus monodon) trong 30 ngày, sau đó cảm nhiễm với WSSV (Kumaran et al., 2010). - Kết quả ghi nhận tỉ lệ chết tích lũy trong 20 ngày ở nghiệm thức bổ sung IgY có chất bổ trợ thảo dược (20%) thấp hơn nghiệm thức bổ sung IgY không có chất bổ trợ thảo dược (50. - Bên cạnh đó, nghiên cứu bổ sung IgY giúp đề kháng các tác nhân gây bệnh khác cũng được ghi nhận. - Nghiên cứu bổ sung IgY có chứa kháng thể kháng V. - alginolitycus giúp nâng cao tỉ lệ sống của bào ngư (Haliotis diversicolor supertexta), với tỉ lệ chết tích lũy ở nhóm bổ sung 5% IgY và 10% IgY (30%) thấp hơn so với nhóm không bổ sung IgY (100. - Đặc biệt, nhóm bào ngư được bổ sung IgY có tỉ lệ sống 90% trong 2 ngày đầu sau cảm nhiễm (Wu et al., 2011). - Nghiên cứu bổ sung kháng thể IgY kháng đặc hiệu ictaluri (tỉ lệ 1,25%) lòng đỏ trứng gà chứa IgY kháng E. - Một nghiên cứu khác trên cá thơm (Plecoglossus altivelis) ghi nhận việc bổ sung IgY chứa kháng thể kháng V. - Tiếp theo, cá được cho ăn bổ sung liều lượng này liên tục 7 ngày trước cảm nhiễm và 1 ngày sau cảm nhiễm ghi nhận tỉ lệ chết lần lượt là 36% và 45% tương ứng với việc phòng và trị bệnh. - Qua đó cho thấy rằng, bổ sung IgY đặc hiệu có thể giúp cá đề kháng với tác nhân gây bệnh (Li et al., 2014).. - 3.2 Ảnh hưởng của việc bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà lên sự đáp ứng miễn dịch của tôm thẻ chân trắng (Penaeus vannamei) sau khi cảm nhiễm với V. - Mẫu máu tôm được thu ở thời điểm 3 ngày sau cảm nhiễm để phân tích các chỉ tiêu miễn dịch bao gồm tổng tế bào máu, bạch cầu có hạt, bạch cầu không hạt và hoạt tính PO. - Bảng 1: Sự thay đổi tổng tế bào máu (THC), bạch cầu có hạt (GC), bạch cầu không hạt (HC), PO của tôm thẻ chân trắng khi thức ăn bổ sung IgY khác nhau. - Nghiệm thức Thông số miễn dịch. - Kết quả tổng tế bào máu của tôm được trình bày ở Bảng 1 cho thấy NT1 tôm không bổ sung IgY và không cảm nhiễm với V. - parahaemolyticus có tổng tế bào máu là 1,46x10 4 tb/mm 3 khác biệt có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại (p<0,05).. - Trong khi đó, tổng tế bào máu ở các nghiệm thức cảm nhiễm với V. - Khảo sát sự biến động số lượng từng loại bạch cầu, chỉ tiêu bạch cầu không hạt (hyaline cells - HC) ở NT4 gia tăng đáng kể, có giá trị cao nhất với 1,53x10 4 tb/mm 3 khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05) so với các nghiệm thức NT1 (1,25x10 4 tb/mm 3. - Tương tự, chỉ tiêu bạch cầu có hạt (granular cells - GC) tăng cao nhất ở NT4 (0,35 x10 4 tb/mm 3 ) khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05) so với các nghiệm thức còn lại. - Hoạt tính PO được trình bày qua Bảng 1 ghi nhận: sau 3 ngày cảm nhiễm, hoạt tính PO có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05) giữa nhóm không bổ sung IgY (NT1- 0,138x10 4 tb/mm 3 và NT2- 0,126x10 4 tb/mm 3 ) và nhóm có bổ sung IgY (NT3 - 0,112 tb/mm 3 và NT4 - 0,137x10 4 tb/mm 3. - Mặt khác, giá trị PO đạt cao nhất ở NT4 là 0,137x10 4 tb/mm 3 khác biệt có ý nghĩa thống kê (p<0,05) so với các nghiệm thức còn lại.. - Jiravanichpaisal et al., 2006). - Việc bổ sung IgY có thể kích thích hệ miễn. - Trong thí nghiệm này, kết quả phân tích các chỉ tiêu miễn dịch của tôm thẻ chân trắng sau khi cảm nhiễm cho thấy chế độ bổ sung IgYB 0,5% giúp gia tăng đáp ứng miễn dịch của tôm, thông qua sự gia tăng số lượng tế bào máu, bạch cầu có hạt, bạch cầu không hạt và hoạt tính PO.. - Nguyen et al. - (2014) ghi nhận hoạt tính PO cao (tăng 33%) nhưng không có ý nghĩa thống kê (p>0,05) ở nhóm tôm thẻ chân trắng ăn thức ăn có chứa bào tử Bacillus subtilis biểu hiện gene VP28 và cảm nhiễm với WSSV. - Tương tự, chế độ cho ăn bổ sung B. - Như vậy, kết quả thí nghiệm cho thấy chế độ cho ăn bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà (IgYB 0,5%) có thể kích thích hệ miễn dịch đặc hiệu ở tôm thẻ chân trắng và qua đó giúp tôm gia tăng sức đề kháng, tăng tỉ lệ sống khi cảm nhiễm với V.. - Tôm thẻ chân trắng cho ăn thức ăn bổ sung kháng thể lòng đỏ trứng gà (IgY) sẽ giúp tôm tăng. - cường sức đề kháng khi cảm nhiễm với vi khuẩn V.. - Trong đó, tôm được bổ sung IgYB 0,5% có tỉ lệ sống cao nhất so với các nghiệm thức cảm nhiễm với vi khuẩn.. - Thức ăn bổ sung IgYB 0,5% giúp tôm thẻ chân trắng tăng cường miễn dịch, thông qua sự gia tăng chỉ số huyết học (tổng tế bào máu, bạch cầu không hạt, bạch cầu không hạt), và hoạt tính phenoloxidase.. - Thử nghiệm bổ sung IgYB 0,5% cho tôm ở điều kiện ao nuôi nhằm xác định tính hiệu quả của kháng thể lòng đỏ trứng gà trong nuôi tôm thương phẩm.. - et al., 2016. - Lu, Y., Liu, J., Jin, L., et al., 2008. - Lu, Y., Liu, J., Jin, L., et al., 2009. - Thử nghiệm hiệu quả bảo vệ của thức ăn bổ sung kháng thể kháng Edwardsiella ictaluri đối với bệnh gan thận mủ trên cá tra Pangasianodon hypophthalmus. - Nguyen, V.A., Pham, C.K., Pham, H.T., et al., 2014.. - Sritunyalucksana, K., Dangtip, S., Sanguanrut, P., et al., 2014. - Tran, H.L., Nunan, L., Redman, R.M., et al., 2013.. - Xu, Y., Li, X., Jin, L., et al., 2011